三种非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒和两种核酸提取方法的对比

来源：https://zgdwjy.cahec.cn/zgdwjy/article/abstract/202212021

关键词 ：非洲猪瘟病毒 ；标准物质 ；荧光 PCR ；核酸提取试剂

       为评价不同荧光PCR检测试剂盒对非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）的检测效果，以及不同核酸提取方法对ASFV的提取差异，选取ASFV B646L基因标准物质作为模板参照，通过荧光PCR检测对标准曲线、最低检出限（LOD）、特异性、检测时间等进行比较，分析3个厂家商品化ASFV荧光PCR检测试剂盒（A、B、C）的综合性能；选取磁珠法和柱式法两种核酸提取方式，对标准物质核酸提取后进行ASFV荧光PCR扩增，以Ct值大小评价试剂的提取效果。结果显示：3种ASFV荧光PCR试剂盒决定系数（R2）分别为0.985、0.996、0.985，且特异性较好；3种ASFV荧光PCR试剂盒LOD介于10-1~10-2 copies/μL，A试剂盒反应循环数最多且反应时间最长（105 min），LOD为10-2 copies/μL。全自动核酸提取工作站与手工核酸提取Ct值无统计学差异（P＞0.1），批内变异系数（CV）在1.5%以内。结果表明：3种荧光PCR检测试剂盒的综合性能较为理想，A试剂盒更适用于临床含毒量低的样品检测；两种核酸提取方法均可有效提取ASFV B646L基因质粒标准物质。本试验为科学、合理选择ASFV检测和提取试剂提供了数据参考。